U PCR-u (lančane reakcije polimeraze), pakovanje se može činiti jednostavnim, ali izravno utječe na stabilnost reagensa, jednostavnost upotrebe i pouzdane rezultate. Bilo da skladištite i prevozite laboratorije - pripremljeni reagensi ili komercijalne premijere, savladavanje pravilnih PCR tehnja za pakiranje mogu izbjeći zajedničke pogreške i poboljšati eksperimentalnu efikasnost. Ispod dijelimo praktične savjete o odabiru materijala, strategije ambalaže i detalje za pohranu.
I. Odabir ambalažnog materijala: prioritetna kompatibilnost i zaštitu
PCR reakcije su osjetljive na temperaturu, svjetlost i kontaminante, tako da materijali za pakiranje moraju ispunjavati tri ključna zahtjeva: nepropusnost, svjetlost - provjera i hemijska inertnost.
Za cijevi i PCR ploče poželjno je polipropilen (PP), zbog njegove visoke prozirnosti i dnevnice / Rnase {. 0.2 ml tanko - ml tanko {- zidne pcr cijevi su idealne za brzi prijenos topline, dok su 0,5 ml cijevi za pohranu koncentriranih reagensa. Za 96 - dobro PCR ploče, preporučujemo odabir suknjenog dizajna (za lakoću robotske manipulacije) ili neskriveni dizajn (za očuvanje prostora).
Metoda zaptivanja: Konvencionalne cijevi centrifuge koriste ravne ili podignute kape (kako bi se spriječilo isparavanje i sušenje). Međutim, za dugoročno - termin, toplota - brtvljenje filma (kao što je parafilm) ili prozračan film (kao što je Aeraseal) se preporučuje da bi se uravnotežio unutarnji i vanjski pritisak. PCR ploče se preporučuju za korištenje ljepljivih aluminijumskih folija (visoko - otporan na temperaturu) ili self - ljepljivi film (za jednokratnu - upotrebu).
Zaštita od lampica: Reagensi koji sadrže svjetlost - osjetljive sastojke (poput određenih boja ili prajmera) trebaju biti omotani u aluminijumsku foliju ili crne PCR ploče (dostupne od nekih proizvođača).
II. AIKTIKING Tehnike: minimiziranje gubitaka od ponovljenog zamrzavanja ciklusa odmrzavanja
Alikvoting reagens je osnovni korak u PCR ambalaži i direktno utječe na eksperimentalnu reproduktivnost.
Master Mix Aliquoting: Komercijalni master mješavine (poput Taq Enzimskog i DNTP miksa) preporučuju se alikvotirani na temelju jačine zvuka reakcije plus 5% - 10% marže (npr. Za reakciju od 20 μl, aliquot 22 μl po cijevi). Izbjegavajte upotrebu izravno od rasutog pakiranja, kao opetovano zamrzavanje; - Thaw ciklusi mogu dovesti do smanjene enzimske aktivnosti (Taq enzim može izgubiti oko 5% aktivnosti zamrzavanja zamrzavanja).
PRIMERI I PREDMETI: PRIMERI (posebno prilagođeni temeljnici) preporučuju se alikotirani sa 100 μm dionica i pohranjena u - 20 stepeni. Razrijediti za radnu koncentraciju (obično 0,1-1 μm) prije upotrebe. Predlošci kao što su genomički DNK trebali bi biti alikirani u samomnom - koriste količine kako bi se izbjegle unakrsne kontaminacije.
Savjeti za prevenciju kontaminacije: Osigurajte da su cijevi centriranje suvo prije alikvotiranja (preostali etanol može inhibirati PCR), pre - cool pipette savjeti za sprečavanje hladnih reagensa da se na zidu i nose rukavice u cijelom procesu kako bi se izbjegle kontaminacija DNK kože.
III. Označavanje i rekord: Izbjegavajte zamku "Crna kutija"
Clear Označavanje je ključno za PCR ambalažu; Nepravilno označavanje može upropastiti čitav eksperiment.
Obavezno označavanje informacija: Ime reagensa (npr. "2 × taq mastermix"), koncentracija / sadržaj (npr. "10 mm DNTPS"), serijski broj (za sljedivost), uvjeti skladištenja (npr. "-20 stepen zaštićen od svjetlosti") i datum isteka (npr. "Upotreba u roku od 6 mjeseci").
Posebno označavanje: Ako reagens sadrži glicerol (antifriz), boje (npr. Sybr Green) ili aditive (npr. BSA), moraju se osigurati dodatne informacije (npr. "Sadrži 50% glicerola") ne čuvati na visokim temperaturama ").
Sinhronizacija zapisa: Preporučuje se korištenje proračunske tablice ili laboratorijskog softvera (npr. Labguru) za snimanje detaljnih parametara sadržaja svake cijevi (npr., Redoslijed prajme, TM vrijednosti) i pridruži ih fizičkim brojem naljepnice.
IV. Skladištenje i transport: Temperatura uravnoteženja i fizikalna zaštita
Stabilnost PCR reagenata visoko ovisi o uvjetima skladištenja, a za vrijeme transporta potreban je dodatna zaštita.
Opšte skladištenje:
Enzimi (taq, obrnuti transkript): Dugo - pojmovo skladište u - 20 stepeni (izbjegavajte ponovljene cikluse smrzavanja zamrzavanja; Alikvot i trgovina u -80 stepeni za buduću upotrebu);
Prajmeri / sonde: pohranite u -20 stepeni više od 1 godine (ako sadrži modificiranu grupu kao što su biotin, štiti od svjetlosti);
Ne - enzimski međuspremnici (npr. PBS): Kratko - termin pohrana u 4 stepena (do 1 mjeseca).
Zahtevi za prevoz:
Za prevoz hladnog lanca koristite suhi led (- 78 stepen) za enzime (održavan ispod -20 stepeni) i plavi led (oko 0 stepeni) za pufere za kratkoročni prevoz.
Izbjegavajte pretjeranu vibraciju (PCR ploče treba osigurati u pjenim okvirima kako bi se spriječilo miješanje reagenata između bunara).
Tokom visokih ljetnih temperatura dodajte izolacijski sloj na ambalažu (npr. Torba za izolaciju aluminijske folije + smrznuto gel paket).
V. Zajednički problemi i rješenja
Problem 1: Oborine reagensa (npr. DNTPS ili mgcl₂ padavina na niskim temperaturama) → Rješenje: Kratko centrifuga (1000 o / min, 1 minut) prije alikvariranja. Rastvarajte u inkubatoru od 37 stepeni prije upotrebe i vrtloge da se temeljito miješa.
Problem 2: ploča za brtvljenje lako se ljušti → Rješenje: Izaberite toplotu - otporni za brtvilo sa lepljivom podlogom ili koristite eksperimente za toplotu (pogodno za visoko - eksperimente kroz protok).
Problem 3: Zamućene naljepnice → Rješenje: Koristite vodootporni marker (poput oštrine) ili laserski - naljepnice za ispis kako biste spriječili da se rukopis izbriše alkohol.
Zaključak
PCR ambalaža je više od "pakiranja" reagensa; To je prva linija odbrane eksperimentalne pouzdanosti. Odabirom odgovarajućih materijala, standardiziranjem procesa alikinja, održavanje temeljnog označavanja i održavanje stroge kontrole temperature tijekom transporta, možete značajno smanjiti ljudsku grešku, osiguravajući stabilnije reakcije pojačanja i pouzdanije rezultate. Zapamtite: detalji određuju uspjeh. Pravilne PCR PAKOVANJE PAKOVANJA Može uštedjeti značajno vrijeme rješavanja problema tokom cijelog vašeg eksperimenta!