Ispitivanje PCR (lančana reakcija polimeraze) je osnovna tehnologija u molekularnom dijagnostiku. Standardizacija njegovih procesa pakiranja i testiranja izravno utječe na tačnost i biološku provjeru rezultata. Ovaj članak pruža profesionalnu perspektivu na ključne kontrolne točke kvaliteta tokom procesa PCR testiranja.
Primanje uzoraka i prethodne obrade su prvi koraci u procesu. Laboratorije moraju strogo provjeriti identifikaciju uzorka, uvjete transporta i vrijeme skladištenja kako bi se osiguralo integritet uzorka. Nakon primitka, uzorci moraju biti numerirani i registrirani u ormaru za biološku sigurnost i podvrgnuti se pre - postupcima obrade kao što su liza i ekstrakcija nukleinske kiseline na osnovu tipa testa. Tijekom ove faze potreban je sistem za verifikaciju osobe koja je dva.
PCR Reaction System Priprema mora se izvesti unutar čiste klupe. Operatori moraju nositi zaštitnu opremu nivoa 3 i koristiti nuklease - besplatne potrošne materijale. Priprema reagensa pridržava se načela "jednosmjerne tokove rada", prelaskom iz područja pripreme reagensa na područje za preradu uzoraka, a zatim na područje pojačanja. Negativne kontrole, pozitivne kontrole i interne kontrole moraju biti uključene u svaku reakcijsku seriju za praćenje eksperimentalne valjanosti.
Tijekom faze pojačanja i testiranja, PCR instrument mora biti pre - kalibrirani i temperaturni ciklični parametri provjereni. Postupak reakcije obično uključuje tri koraka: denaturacija (94 - 95 stepeni), žarenje (50-65 stepeni) i proširenje (72 stepena). Broj ciklusa prilagođen je na osnovu cilja otkrivanja. Fluorescentna PCR u stvarnom vremenu također zahtijeva praćenje praga fluorescentnog signala specifičnih kanala.
Analiza rezultata i izvještavanje moraju obavljati kvalificirani tehničari. Sirovi podaci moraju pregledati najmanje dva stručnjaka za potvrdu krivulje pojačanja, vjerodostojnost CT vrijednosti i usklađenost materijala za kontrolu kvalitete sa standardima. Završno izvješće treba uključivati informacije o metodologiji testiranja, osnova za tumačenje rezultata i izjavu o ograničenjima ispitivanja.
Čitav proces strogo se pridržava ISO 15189 i relevantnih CDC specifikacija. Trostruki garancijski sustav nadgledanja okoliša, održavanja opreme i obuke osoblja za osiguranje pouzdanosti i sljedivosti PCR testiranja.